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細胞長得慢、傳代不易貼壁,該怎么挽救?

更新時間:2022-02-16  |  點擊率:1987

  各類細胞產品是我們做實驗研究的基礎,一支小小的細胞,關乎我們各種實驗的成功與否,細胞的”小事情“,在實驗中都是”大事情“,如果你的細胞出現(xiàn)生長緩慢、不貼壁等情況,那你可要注意了,這就是細胞狀態(tài)不好的信號,要及時“挽救”,不然很有可能細胞就瀕臨死亡。

  問題一:細胞生長緩慢

  細胞長得慢是細胞培養(yǎng)過程中比較常見的問題,一般來說,細胞活力和濃度一直是細胞健康的標志,細胞長得慢的話,活力和濃度可能都會直線下降。

  造成細胞生長緩慢的主要原因及解決方法:

  1,新配置的培養(yǎng)基以及換了新的血清,細胞不適應;

  解決方法:最好使用最適宜的培養(yǎng)基,如果條件不允許,可以換液時不要全量換液逐漸增加新的培養(yǎng)基比例,1/4、1/2、3/4到1,多傳代幾次,讓細胞慢慢適應。

  2,細胞密度不夠

  有些細胞是細胞依賴性細胞,密度過低生長緩慢;也可能是細胞分泌促生長活性物質過少,細胞連接不好等原因。

  解決辦法:增加細胞接種密度;將細胞從大皿轉移至小皿培養(yǎng);適當增加培養(yǎng)基血清濃度。

  3,培養(yǎng)環(huán)境改變

  細胞培養(yǎng)箱的溫度、CO2、細胞的生存環(huán)境要適宜,一般來說最佳溫度:是37 ℃, CO2:濃度為5% , pH:為7.2-7.4,還有滲透壓等,大家要注意調好,不要隨意改變。

  4,污染,如支原體,細菌,真菌等

  解決辦法:細胞污染是多方面的原因,一方面要嚴格無菌操作技術、保持清潔的環(huán)境,另一方面,污染之后要及時鑒別和處理,并且,建議大家使用品質良好的細胞株和培養(yǎng)基,這是是減少污染的最好方法。

  5,細胞本身狀態(tài)改變,如衰老等

  解決辦法:沒有可逆的辦法,只能及時更換新的細胞。

  當然如果培養(yǎng)細胞是原代的話,生長速度是比較緩慢的,如果沒有及時換液,營養(yǎng)成分不夠,細胞也會生長緩慢。用螺旋口瓶培養(yǎng)細胞時,需將瓶蓋微松,以保證通氣,要保持培養(yǎng)箱內空氣干凈等。

  其實只要條件適于細胞生長,細胞在自己的“小房子”里面舒適自由,那么,它一定會長得很快,并且,形態(tài)越來越“漂亮”。

  問題二:細胞不貼壁

  一般來說,正常情況下,細胞培養(yǎng)一段時間后,正常生長的小細胞們貼在壁上,優(yōu)哉游哉地享受生活,而沒能存活的細胞和其他種類的細胞則可能懸浮在上,如果你的細胞不貼壁,極有可能是沒有存活下來。

  細胞不貼壁可能原因及解決辦法:

  1,胰酶消化過度;解決方法:適當縮短胰酶消化時間或降低胰酶濃度。

  2,支原體污染;解決方法:分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。

  3,培養(yǎng)瓶瓶底不干凈;解決方法:換用新的培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)瓶。

  4,消化液或培養(yǎng)液配制錯誤、過期儲存、儲存不當;解決方法:重新配置消化液或培養(yǎng)液

  5,細胞老化;解決方法:同樣,沒有可逆的辦法,只能及時更換新的細胞。

  6,接種細胞起始濃度太低或太高;解決方法:根據細胞特性接種適量的細胞。

  總之,養(yǎng)細胞需要耐心,要溫柔,要不然她真的會給你顏色看哦。上文也提到了,使用品質良好的細胞株和培養(yǎng)基是減少污染的最好方法,同時也是保證細胞生長良好的前提。

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